马传贫病毒核蛋白基因的克隆、表达和在诊断书
项目名称:马传贫病毒核蛋白基因的克隆、表达和在诊断书
单位名称:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
单位地址:哈尔滨市南岗区马端街427号
联系人:孔宪刚
邮政编码:150001
电话号码:0451-2725786-207
传真号码:0451-2733132
项目来源:--
项目规模:--
研发时间:--
价格:--
产量:--
合作方式:--
市场风险:--
成果简介:马传贫病毒结构蛋白的研究证明，该病毒主要由两种糖蛋白(gp90、gp45)和4种无糖基的核蛋白(P15、P26、P11和P9)组成。这4种核蛋白是由病毒核蛋白基因（gag gene）编码的聚肽（Pr55gag）经蛋白酶裂解而成，其中P26是用于诊断的主要群特异性抗原，约占整个病毒蛋白的40%。自从Coggins和Norcross建立了免疫琼脂双扩散试验的马传贫诊断方法以来，因为所有的马传贫感染马列都能产生对P26抗原的沉淀抗体，所以世界各国一直把该方法作为标准的马传贫诊断法。然而这种方法的敏感性较低，很难检出低水平的P26抗体。因此，为了建立实用敏感的马传贫诊断方法，有效地清除传染源，近年来各国学者应用马传贫病毒可溶性抗原和提纯的P26抗原，相继建立了酶联免疫吸咐试验方法，与AGID诊断法并列使用，以弥补两种方法各自的不足。但是由于这两种诊断方法所使用的抗原的常规生产，制备和纯化非常困难，而且产量和质量都较低。特别是用常规方法纯化的抗原用于这两种方法时，有时出现非特异性反应，给马传贫病的诊断带来难题。为了获得高质量的马传贫诊断抗原，我们应用昆虫杆状病毒表达系统对马传贫病毒核蛋白和P26基因进行了克隆，表达和应用研究。在先后获得马传贫核蛋白和P26基因的高效表达产物后，我们用这两种表达蛋白作为ELISA抗原建立了检查马传贫抗体和抗原的两种诊断方法，并作为AGID抗原应用到AGID试验中。经过对马传贫不同经过马血清和马传贫非特异性血清的检查，同时与日本基本公司的马传贫ELISA和AGID诊断试剂盒比较，证明用表达抗原建立的ELISA和AGID诊断方法，无非特异性反应。重复性好，敏感性高，特异性强，优于常规生产的抗原，具有实际应用价值，解决了诊断用抗原的研究和生产开创了新途径。
单位名称:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
单位地址:哈尔滨市南岗区马端街427号
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成果简介:马传贫病毒结构蛋白的研究证明，该病毒主要由两种糖蛋白(gp90、gp45)和4种无糖基的核蛋白(P15、P26、P11和P9)组成。这4种核蛋白是由病毒核蛋白基因（gag gene）编码的聚肽（Pr55gag）经蛋白酶裂解而成，其中P26是用于诊断的主要群特异性抗原，约占整个病毒蛋白的40%。自从Coggins和Norcross建立了免疫琼脂双扩散试验的马传贫诊断方法以来，因为所有的马传贫感染马列都能产生对P26抗原的沉淀抗体，所以世界各国一直把该方法作为标准的马传贫诊断法。然而这种方法的敏感性较低，很难检出低水平的P26抗体。因此，为了建立实用敏感的马传贫诊断方法，有效地清除传染源，近年来各国学者应用马传贫病毒可溶性抗原和提纯的P26抗原，相继建立了酶联免疫吸咐试验方法，与AGID诊断法并列使用，以弥补两种方法各自的不足。但是由于这两种诊断方法所使用的抗原的常规生产，制备和纯化非常困难，而且产量和质量都较低。特别是用常规方法纯化的抗原用于这两种方法时，有时出现非特异性反应，给马传贫病的诊断带来难题。为了获得高质量的马传贫诊断抗原，我们应用昆虫杆状病毒表达系统对马传贫病毒核蛋白和P26基因进行了克隆，表达和应用研究。在先后获得马传贫核蛋白和P26基因的高效表达产物后，我们用这两种表达蛋白作为ELISA抗原建立了检查马传贫抗体和抗原的两种诊断方法，并作为AGID抗原应用到AGID试验中。经过对马传贫不同经过马血清和马传贫非特异性血清的检查，同时与日本基本公司的马传贫ELISA和AGID诊断试剂盒比较，证明用表达抗原建立的ELISA和AGID诊断方法，无非特异性反应。重复性好，敏感性高，特异性强，优于常规生产的抗原，具有实际应用价值，解决了诊断用抗原的研究和生产开创了新途径。