猪伪狂犬病疫苗和野毒鉴别诊断PCR试剂盒
项目名称:猪伪狂犬病疫苗和野毒鉴别诊断PCR试剂盒
单位名称:中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
单位地址:哈尔滨市马端街427号
联系人:童光志
邮政编码:150001
电话号码:0451-2734181
传真号码:0451-2734181
项目来源:--
项目规模:--
研发时间:--
价格:--
产量:--
合作方式:--
市场风险:--
成果简介:在国内用于预防猪伪狂犬病的疫苗主要是gE基因缺失弱毒疫苗，为了了配合全国性猪伪狂犬病根除计划的启动，我们建立了一种复合PCR方法可以有效地区分弱毒免疫猪和野毒感染猪。根据已发表的伪狂犬病病毒（PrV）gB和gE基因序列，设计并合成了两对引物：PB1/PB2和PE1/PE2。以疫苗株Bartha-K61及野毒株S、SU、F、L、Y、Min-A、Shope、S（川）、SL1、10#、EA DNA为模板进行PCR扩增，结果显示用引物PB1/PB2从12株病毒DNA中均扩增出一条长372bp的特异性片段，经HpaⅡ酶切都产生龙活虎21bp和251bp两个片段，与设计大小完全相符；用引物PE1/PE2仅从11株野毒DNA中扩增出一条长为526pb的片段，经SmaⅠ酶切，皆产生动活泼22bp和304bp的两个片段，这些PCR产物大小及其酶切位点与设计完全相符。将反应体系和条件略作改动后，将PB1/PB2、PE1/PE2在同一反应管中同时扩增gB和gE基因序列建立了复合PCR。结果显示11株野毒DNA为模板扩增出372bp和526bp两个片段，而VR株（疫苗）只扩增出372bp一个片段。现用的弱毒疫苗Bartha-K61是gI/gE双基因缺失病毒，因此根据gE基因序列设计的引物PE1/PE2只能扩增PrV野毒，不能扩增疫苗株VR株；PrV gB是主要免疫原性糖蛋白，也是病毒感染和复制所必需的，因此无论强毒和弱毒均有此基因，所以，根据gB基因序列设计的引物PB1/PB2能扩增PrV强毒和弱毒。这种复合PCR已形成试剂盒，可以在现地使用。
单位名称:中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
单位地址:哈尔滨市马端街427号
联系人:童光志
邮政编码:150001
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成果简介:在国内用于预防猪伪狂犬病的疫苗主要是gE基因缺失弱毒疫苗，为了了配合全国性猪伪狂犬病根除计划的启动，我们建立了一种复合PCR方法可以有效地区分弱毒免疫猪和野毒感染猪。根据已发表的伪狂犬病病毒（PrV）gB和gE基因序列，设计并合成了两对引物：PB1/PB2和PE1/PE2。以疫苗株Bartha-K61及野毒株S、SU、F、L、Y、Min-A、Shope、S（川）、SL1、10#、EA DNA为模板进行PCR扩增，结果显示用引物PB1/PB2从12株病毒DNA中均扩增出一条长372bp的特异性片段，经HpaⅡ酶切都产生龙活虎21bp和251bp两个片段，与设计大小完全相符；用引物PE1/PE2仅从11株野毒DNA中扩增出一条长为526pb的片段，经SmaⅠ酶切，皆产生动活泼22bp和304bp的两个片段，这些PCR产物大小及其酶切位点与设计完全相符。将反应体系和条件略作改动后，将PB1/PB2、PE1/PE2在同一反应管中同时扩增gB和gE基因序列建立了复合PCR。结果显示11株野毒DNA为模板扩增出372bp和526bp两个片段，而VR株（疫苗）只扩增出372bp一个片段。现用的弱毒疫苗Bartha-K61是gI/gE双基因缺失病毒，因此根据gE基因序列设计的引物PE1/PE2只能扩增PrV野毒，不能扩增疫苗株VR株；PrV gB是主要免疫原性糖蛋白，也是病毒感染和复制所必需的，因此无论强毒和弱毒均有此基因，所以，根据gB基因序列设计的引物PB1/PB2能扩增PrV强毒和弱毒。这种复合PCR已形成试剂盒，可以在现地使用。